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ELISA試劑盒的制備和結(jié)構(gòu)檢測(cè)
發(fā)表時(shí)間:2023-04-24
ELISA試劑盒是一種常用于檢測(cè)生物分子(如蛋白質(zhì)、抗體等)的分析工具。其制備和結(jié)構(gòu)檢測(cè)通常包括以下步驟:
制備步驟:
1.表面涂層:將需要檢測(cè)的分子(如蛋白質(zhì)、抗原等)固定在微孔板(plate)的表面上,一般使用化學(xué)交聯(lián)或物理吸附等方法實(shí)現(xiàn)。
2.阻斷:用一些不與被檢測(cè)分子反應(yīng)的蛋白質(zhì)(如牛血清白蛋白、干酪蛋白等)來(lái)阻斷微孔板上未被固定的表面,避免后續(xù)的假陽(yáng)性結(jié)果。
3.加入抗體:加入一種特異性抗體,與被檢測(cè)分子結(jié)合。
4.加入檢測(cè)物:通常是酶標(biāo)記的二抗或其他蛋白質(zhì),可以與抗體結(jié)合,形成信號(hào)。
5.加入底物:底物與酶結(jié)合,可以被測(cè)量(如顏色變化等)。
6.檢測(cè):測(cè)量樣品中的信號(hào),以此來(lái)確定被檢測(cè)分子的存在或濃度。
結(jié)構(gòu)檢測(cè)步驟:
1.
SDS-PAGE:使用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)對(duì)試劑盒中的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離和純化,以確保試劑盒中所含蛋白質(zhì)的純度和相對(duì)分子質(zhì)量。
2.Western blotting:將SDS-PAGE中分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,使用特異性抗體檢測(cè)試劑盒中的蛋白質(zhì),以確定試劑盒中是否含有正確的蛋白質(zhì)。
3.HPLC:使用高效液相色譜(HPLC)等方法對(duì)試劑盒中的小分子化合物進(jìn)行分離和純化,以確保試劑盒中所含化合物的純度和含量。
制備步驟:
1.表面涂層:將需要檢測(cè)的分子(如蛋白質(zhì)、抗原等)固定在微孔板(plate)的表面上,一般使用化學(xué)交聯(lián)或物理吸附等方法實(shí)現(xiàn)。
2.阻斷:用一些不與被檢測(cè)分子反應(yīng)的蛋白質(zhì)(如牛血清白蛋白、干酪蛋白等)來(lái)阻斷微孔板上未被固定的表面,避免后續(xù)的假陽(yáng)性結(jié)果。
3.加入抗體:加入一種特異性抗體,與被檢測(cè)分子結(jié)合。
4.加入檢測(cè)物:通常是酶標(biāo)記的二抗或其他蛋白質(zhì),可以與抗體結(jié)合,形成信號(hào)。
5.加入底物:底物與酶結(jié)合,可以被測(cè)量(如顏色變化等)。
6.檢測(cè):測(cè)量樣品中的信號(hào),以此來(lái)確定被檢測(cè)分子的存在或濃度。
結(jié)構(gòu)檢測(cè)步驟:
1.
SDS-PAGE:使用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)對(duì)試劑盒中的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離和純化,以確保試劑盒中所含蛋白質(zhì)的純度和相對(duì)分子質(zhì)量。
2.Western blotting:將SDS-PAGE中分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,使用特異性抗體檢測(cè)試劑盒中的蛋白質(zhì),以確定試劑盒中是否含有正確的蛋白質(zhì)。
3.HPLC:使用高效液相色譜(HPLC)等方法對(duì)試劑盒中的小分子化合物進(jìn)行分離和純化,以確保試劑盒中所含化合物的純度和含量。